- 体积排阻(SEC)
- 亲和色谱(AC)
- 离子交换(IEX)
- 疏水相互作用(HIC)
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体积排阻色谱(SEC)
SEC,也称为凝胶渗透色谱法(GPC),在样品通过固定相时,通过分子大小分离组分。 决定因素是固定相的孔径分布。但是,这不是筛分效应,而是扩散效应,因为大分子的洗脱速度要比小分子快。
较小的分子可以更好地渗透到固定相的孔中,因此与大分子相比,在色谱柱中的停留时间更长,而大分子的移动空间较小,更容易被洗脱液带走。因此,大分子首先洗脱。
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亲和色谱(AC)
亲和层析是一个多步骤的过程(结合,淋洗,洗脱),其特征在于目标分子与色谱柱材料的特异性结合。因此,固定相的配体必须与目标分子匹配。在淋洗步骤中,去除样品的所有非特异性结合的部分。随后的洗脱步骤释放目标分子。
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离子交换色谱(IEX)
离子交换色谱法根据分子的总电荷分离分子。
这是一个竞争性过程,其中目标分子和样品中具有相同方向极性的所有分子首先“非特异性”结合至固定相,然后逐渐洗脱。
例如,阳离子交换用于具有正总电荷的目标分子。
固定相本身带相反电荷,即带负电荷。与固定相的初始结合发生在低离子强度条件下,即样品的流动相具有低电解质含量。通过盐梯度洗脱。通过增加盐浓度,电荷弱的蛋白质首先洗脱,而在盐浓度较高的蛋白质强电荷的蛋白质随后洗脱。
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疏水相互作用色谱(HIC)
基于疏水相互作用和梯度洗脱进行分离。
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